Renkli önceden boyanmış protein işaretleyici (10-18 kDa)

Bu korunmuş protein işaretleyici, elektroforez sırasında kolay tanımlama için farklı bant renklerine sahip, 10 kDa ila 180 kDa arasında değişen 10 saflaştırılmış protein içerir. 70 kDa bandı turuncu renkte, 10 kDa bandı yeşil renkte ve geri kalan sekiz bant mavi renkte görünür. SDS-PAGE'de protein ayrımını izlemek, PVDF, naylon veya nitroselüloz membranlara Western transfer verimliliğini değerlendirmek ve rutin laboratuvar iş akışlarında protein molekül ağırlığını tahmin etmek için yaygın olarak kullanılır. Doku kesitlerinin Parafin Mikrotomu kullanılarak hazırlandığı histoloji laboratuvarlarında bu işaretleyici, aynı dokudan türetilmiş numuneler üzerinde aşağı yönlü immünolojik test analizinden önce protein bütünlüğünü doğrulamak için sıklıkla bir kalite kontrol aracı olarak kullanılır. İşaretleyici, yükleme tamponunda kullanıma hazır olarak sağlanır ve numune yüklemeden önce ısıtma, seyreltme veya indirgeyici madde eklenmesini gerektirmez.

Tampon bileşimi, pH 7,5'te 62,5 mM Tris-fosfat, %2 SDS, 5 mM EDTA, %0,02 Proclin 300 ve %33 gliserol içerir. Bu formülasyon protein stabilitesini ve tutarlı elektroforetik migrasyonu sağlar. En iyi sonuçları elde etmek için işaretleyicinin oda sıcaklığında çözülmesi, kullanılmadan önce iyice karıştırılması ve kaynatılmaması gerekir. Kuyu başına 5 ila 10 ul'lik bir numune hacmi tavsiye edilir; 5 x 1,5 mm jellerde net bant görselleştirmesi için tipik olarak 5 ul yeterlidir. İlk kez kullananlar, özel jel koşullarına dayalı olarak ön deneyler yoluyla optimum yüklemeyi belirlemelidir. Aşırı uzatılmış elektroforez bant difüzyonuna neden olabilir ve bundan kaçınılmalıdır. Doku örneği tanımlama ve etiketleme için Gömülü Kaset Yazıcı ve Slayt Yazıcı kullanan laboratuvarlar, doku kesitlerinde immün boyama prosedürlerini takip eden protein saptama iş akışları için referans standart olarak bu işaretleyiciye de güvenmektedir.

Bu protein işaretleyicisi, Western blotlama ve protein transfer doğrulaması da dahil olmak üzere çok çeşitli immün algılama uygulamaları için uygundur. Aktarımdan sonra deneysel bant verileri, yarı kantitatif protein tahmini için 2D/3D Tam Slayt Doku ve Hücre Görüntüleme Kantitatif Analiz Sistemi kullanılarak daha da ölçülebilir. Görünür moleküler ağırlık bantları, üretim partileri arasında yaklaşık %5 oranında değişebilir. İşaretleyici, iyice karıştırılarak çözüldükten sonra -20°C'de 24 aya kadar veya 4°C'de 3 aya kadar saklanmalıdır. Tekrarlanan donma-çözülme döngülerinden kaçınılmalıdır; Düzenli kullanım için porsiyonlama önerilir. Parafin Balmumu Eritici ve Parafin Düzeltici gibi destek ekipmanları, doku işleme, gömme, kesit alma ve protein analizinin sırayla gerçekleştirildiği entegre histopatoloji iş akışlarında sıklıkla bu işaretleyicinin yanında kullanılır. Kullanım sırasında laboratuvar önlükleri ve tek kullanımlık eldivenler de dahil olmak üzere standart laboratuvar güvenlik uygulamalarına uyulmalıdır.